NEB內(nèi)切酶的對照實(shí)驗(yàn)怎么做

　　NEB內(nèi)切酶可提供210多種內(nèi)切酶，其中有130多種內(nèi)切酶為重組酶。重組技術(shù)的運(yùn)用，使NEB能在提高內(nèi)切酶的純度及品質(zhì)的同時(shí)，削減生產(chǎn)費(fèi)用。

　　加入酶之前將反應(yīng)混合物混勻，可以用移液槍上下吹打或輕彈管壁，然后在離心機(jī)中快速離心。切忌振蕩混勻。

　　一般情況下，我們推薦使用5-10單位酶量/μgDNA，基因組DNA用10-20單位酶量消化1小時(shí)。入內(nèi)切酶的量應(yīng)不超過總體積的10%，以避免甘油過量引起的星號活性。貯存液中的添加物和底物溶液中尚存的殘余物（會(huì)導(dǎo)致小體積反應(yīng)出現(xiàn)問題。如果在切割底物DNA時(shí)遇到了問題，建議加入以下對照實(shí)驗(yàn)：

　　1、酶切對照DNA（含有多個(gè)已知內(nèi)切酶切割位點(diǎn)的DNA，如LambdaDNA或腺病毒-2DNA），以檢測內(nèi)切酶的活性。

　　2、如果對照DNA能夠被切割而實(shí)驗(yàn)中的底物DNA不能，可以將這兩種DNA混合在一起再進(jìn)行酶切，以檢測實(shí)驗(yàn)用的底物DNA中是否存在抑制反應(yīng)的物質(zhì)。如果確實(shí)存在某種抑制因子（通常為鹽、EDTA或酚），則混合之后對照DNA也不能被切割。

　　3、當(dāng)內(nèi)切酶在非zui適條件下使用時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生星號活性。

　　4、可以通過以下方法降低星號活性：使用高保真（HF）內(nèi)切酶、縮短溫育時(shí)間、使用省時(shí)內(nèi)切酶或者增大反應(yīng)體積。